AAT Bioquest  21190  RatioWorks™BCFL AM*BCECF的 zhuo越替代品*

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AAT Bioquest BCFL AM*BCECF zhuo越替代品-常備現(xiàn)貨

美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助 quan 世 jie 的科學家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學，免疫學，細胞生物學和分子生物學等領(lǐng)域。AAT Bioquest會不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個領(lǐng)域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest  21190  RatioWorks™BCFL AM*BCECF的 zhuo越替代品* 1mg，產(chǎn)品簡介：

產(chǎn)品品牌：AAT Bioquest

產(chǎn)品貨號：21190

產(chǎn)品名稱：RatioWorks™BCFL AM*BCECF的 zhuo越替代品*

產(chǎn)品規(guī)格：1mg

AAT Bioquest BCFL AM*BCECF zhuo越替代品-常備現(xiàn)貨 

AAT Bioquest  21190  RatioWorks™BCFL AM*BCECF的 zhuo越替代品* 1mg，產(chǎn)品說明：

內(nèi)pH在許多細胞事件中起著重要的調(diào)節(jié)作用，包括細胞生長、鈣調(diào)節(jié)、酶活性、受體介導的信號轉(zhuǎn)導、離子轉(zhuǎn)運、內(nèi)吞作用、趨化性、細胞粘附和其他細胞過程。近年來，pH敏感熒光染料已廣泛用于監(jiān)測細胞內(nèi)pH值的變化。使用熒光pH指示劑的成像技術(shù)還允許研究人員以更高的空間分辨率和采樣密度研究這些過程，而使用其他技術(shù)（如微電極）可以實現(xiàn)。其中，2'，7'-雙-（2-羧乙基）-5-（和-6）-羧基熒光素（BCECF）是 zui shou huan ying 的pH探針，因為它可用于按比例監(jiān)測細胞pH值。然而，所有商用BCECF AM都是至少三種異構(gòu)體的復雜混合物，批次間的比例不同，使BCECF應(yīng)用復雜化。BCFL的開發(fā)是為了克服與BCECF AM相關(guān)的這種異構(gòu)體困難。作為BCECF，BCFL表現(xiàn)出pH依賴性的雙激發(fā)，與BCECF基本相同。它的pKa為~7.0，也與BCECF相同。與BCECF一樣，BCFL的雙激發(fā)光譜具有454 nm的等吸點，應(yīng)使BCFL成為良好的激發(fā)比pH指示劑。BCFL比率成像使細胞內(nèi)pH測定基本上獨立于幾個可變因素，包括染料濃度，光程長度，細胞泄漏和光漂白率。BCFL，AM是單一異構(gòu)體，使得pH測量比BCECF，AM更具重現(xiàn)性，BCECF，AM由許多不同的異構(gòu)體組成。

平臺

熒光顯微鏡

Excitation單一： FITC比率：AmCyan/FITC

Emission單一： FITC比率：AmCyan/FITC

推薦板 黑色墻壁/透明底部

熒光酶標儀

Excitation：430, 505

Emission：535

Cutoff：515

推薦板：黑色墻壁/透明底部

儀器規(guī)格：底部讀取模式

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環(huán)。

比率工程™ BCFL AM 庫存解決方案

在高質(zhì)量無水DMSO中制備10至20 mM的RatioWorks™ BCFL AM儲備溶液。

工作溶液的制備

RatioWorks™ BCFL AM 工作解決方案

在實驗當天，將RatioWorks™ BCFL AM溶解在DMSO中或?qū)⒅甘緞﹥淙芤旱牡确衷嚇咏鈨鲋潦覝亍Ｔ谀x擇的緩沖液（例如，Hanks和Hepes緩沖液）中制備5至50μM的RatioWorks™ BCFL AM工作溶液。

注意 非離子洗滌劑Pluronic® F-127可用于增加AM酯的水溶性。在染色緩沖液中，最終的Pluronic® F-127濃度應(yīng)約為0.02%。各種Pluronic® F-127產(chǎn)品可以從AAT Bioquest購買。避免在Pluronic® F-127存在下長期儲存AM酯。

注意 如果您的細胞含有有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白，則可以將丙磺shu（1-2 mM）添加到染料工作溶液中（最終孔濃度為0.5-1 mM），以減少脫酯指示劑的泄漏。多種ReadiUse™丙磺shu產(chǎn)品，包括水溶性、鈉鹽和穩(wěn)定溶液，均可從AAT Bioquest購買。

實驗方案樣本

以下是將RatioWorks™ BCFL AM加載到活哺乳動物細胞中的推薦方案。此協(xié)議僅提供指南，應(yīng)根據(jù)您的具體需求進行修改。

1.    根據(jù)需要準備活細胞。

2.    第二天，將 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）的 RatioWorks™ BCFL AM 工作溶液加入細胞板中。

注意 如果您的化合物干擾血清，請在上樣染料前用新鮮的HHBS緩沖液（100

孔板為96 μL/孔，25孔板為384 μL/孔）替換生長培養(yǎng)基。

3.    將裝載染料的板在37°C的細胞培養(yǎng)箱中孵育30至60分鐘。

4.    用您選擇的HHBS或緩沖液替換染料工作溶液，以去除任何多余的探針。

5.    使用 HHBS 或您選擇的緩沖液制備復合板。

6.    根據(jù)需要運行pH測定，并使用配備FITC濾光片組的熒光顯微鏡或熒光板讀數(shù)器在Ex / Em = 490 / 535 nm截止值515 nm的同時測量熒光。對于比率測量，在Ex/Em時監(jiān)測熒光1= 430/535 nm 截止值 515 nm 和防爆/電磁2= 505/535 nm 截止值 515 nm。

注意化合物添加量為 50 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）。

注意 測定應(yīng)在化合物添加后 3 至 5 分鐘內(nèi)完成。但是，建議至少 8 分鐘進行數(shù)據(jù)收集。

產(chǎn)品訂購信息：

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